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發酵菌種的保藏方法

發布時間:2013-11-06 13:51:51

菌種保藏的意義 微生物学研究和微生物育種工作的重要組成部分是進行菌種保藏,其任务首先是使菌種不致死亡,同時還要盡可能設法把菌種的優良條件保持下来而不致向壞的方面轉化。 因为從事微生物学以及生命科学研究的基本材料是菌種,特别是利用微生物進行有關生産如抗生素、氨基酸、釀造等工业,更離不開菌種。 菌種保藏的原理 一般可通過保持培養基營養成分在最低水平缺氧狀态,幹燥和低溫,使菌種處于“休眠”狀态,抑制其繁殖能力。菌種保藏主要是根據菌種的生理生化特點,人为創造條件使孢子或菌體的生長代謝活动盡量降低,以減少其變異。一種好的保藏方法首先應能長期保持菌種原有的優良性狀不變,同時還需考慮到方法本身的簡便和经濟,以便生産上能推廣使用。 菌種保藏的方法 砂土管保藏法:将孢子懸浮液轉移至滅過菌的砂土管中,于真空幹燥器内用真空泵抽幹,再轉至有幹燥劑的容器中,密封低溫保藏。本方法是用人工方法模拟自然環境使菌種得以柄息。适用于細菌的芽孢、黴菌和放線菌孢子的保藏,不适于對幹操敏感的無芽孢的細菌和酵母菌。主要包括砂土制備和真空抽幹兩步。 超低溫保藏法:由于現在超低溫冰箱的使用已較普及,所以菌種的超低溫保藏法在生産企业和研究機構已得到廣泛應用。該方法的要點是:将要保藏的菌種置于10%甘油或二甲基亞砜保護劑中,密封于試管或安瓿管中,然後将其放入超低溫冰箱中于- 70℃下保藏。該法簡便易行,而且保藏效果較好。 石蠟油封保藏法:将生長好的新鮮斜面在無菌條件下倒入已滅菌的液體石蠟,油層要高出斜面上端1cm,使之與空氣隔絕,然後垂直放于室溫或冰箱内保藏即可。这種方法也比較簡便,且保藏時間一般可長达1年以上。适于保存部分黴菌、酵母菌、放線菌,但對細菌效果較差,對某些能同化烴類的微生物則不适用。 斜面低溫保藏法:将菌株接種于合适的斜面培養基上,待生長好後置于4℃冰箱保藏,每隔一定時間進行移接培養後再将新斜面繼續保藏。这種保藏方法簡單,存活率高,易于推廣,经常使用的菌種可采用这種方法。其缺點是菌種仍有一定強度的代謝活动條件,保存時間不長,而且傳代多,因此菌種容易産生變異。 冷凍幹燥法:此法的原理是在低溫下迅速将細胞凍結以保持細胞結構的完整,然後在真空下使水分升華。这樣菌種的生長和代謝活动處于極低水平,不易發生變異和死亡,因而能長期保存,一般为5-10年。微生物在此條件下易死亡,所以需加入一些物質作保護劑,一般常用的是脫脂牛奶、血清等。該法存活率高,變異率低,并能廣泛适用于細菌(有芽孢和無芽孢的)、酵母、黴菌孢子、放線菌孢子和病毒等,因此是目前廣泛采用的好方法。其缺點是手續煩瑣,操作複雜,要求嚴格,并需要有一定設備條件。 本文參考《發酵工程原理與技術》一書。
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