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發酵産物的沉澱提取法與生物發酵网上配资

發布時間:2012-10-23 11:58:17

沉澱是溶液中的溶質由液相變成固相析出的過程,主要是为了通過沉澱达到濃縮的目的,或通過沉澱除去非必要的成分;其次将已純化的産物轉为固體便于保存。 沉澱法是根據生物發酵网上配资的發酵産物在等電點時,或在一定濃度的有機溶劑、中性鹽類或有機沉澱劑中溶解度降低而析出沉澱,或生物發酵用网上配资的發酵産物與一些酸、堿、鹽類等形成不溶性鹽類或複合物而析出沉澱的原理,從而达到分離提取的目的。 1、等電點沉澱法 有些生物發酵网上配资發酵産物例如酶、氨基酸和某些抗菌素具有兩性電離的性質,随着溶液PH值的不同,酸堿極性基團例如氨基酸的氨基與羧基進行着不同程度的解離,從而使整個分子帶有正電荷或負電荷,隻有當溶液的PH值达到一定值時整個分子所帶的正負電荷等,靜電荷等于零,形成偶極離子,这時由于分子之間的相互撞擊,通過靜電引力的作用結合成較大的聚合體而沉澱析出,此時的PH值稱为該分子的等電點。因而在等電點時这些生物發酵用网上配资發酵産物的溶解度最小。用等電點法提取發酵産物就是根據这一性質。 由于各種蛋白質分子内部所含堿性氨基酸和酸性氨基酸的數目不同,各種蛋白質的等電點有差别。凡是堿性氨基酸含量多的蛋白質,等電點偏堿性;凡是酸性氨基酸含量多的蛋白質,等電點偏酸性。因为羧基解離度大于氨基解離度,所以,大多數蛋白質的等電點PI<7.0而接近5.0。同樣氨基酸分子上所含氨基、羧基等極性基團的數目以及各種基團的解離程度不同,也有各自的等電點。酸性氨基酸的等電點偏酸性,堿性氨基酸的等電點偏堿性而中性氨基酸中ɑ-羧基的電離比ɑ-氨基容易,等電點也偏酸性,一般pl为6.0左右。 2、不溶性鹽沉澱法 某些生物發酵网上配资的代謝産物在一定的pH值下,能與酸堿或金屬離子、表面活性劑等形成不溶性鹽而沉澱析出,再用适當的方法使複合物溶解达到分離提取的目的,已用于工业生産的有單甯沉澱提取酶、鋅鹽法提取谷氨酸、鈣鹽法提取檸檬酸和鹽酸鹽法提取四環素等等。 3、有機溶劑沉澱法 近来的研究有所發展,有機溶劑可能破壞蛋白質的某種鍵如氫鍵,使其空間結構發生某種程度的變形,使一些原来包在内部的疏水基因暴露于表面,與有機溶劑的疏水基園結合,形成疏水層,從而使蛋白質沉澱。當蛋白質的空間結構發生變形超過一定程度,就會導致完全的變性。 有機溶劑的選擇首先是能和水混溶。隻有選用合适的有機溶劑,注意調整樣品的濃度、溫度、生物發酵网上配资、pH值和離子強度,使这些因子綜合地發揮作用,才能獲得較好的提取效果。 4、鹽析法 鹽析法又稱中性鹽沉澱法,是酶和蛋白質提純工作中使用較早的方法之一,要使酶蛋白沉澱,就必須破壞其水膜,中和其電荷。由于中性鹽的親水性大于酶蛋白的親水性,當加入大量中性鹽時,它們能奪去酶蛋白表面的電荷,又使酶蛋白表面的電荷被中和,而使沉澱析出。 由于各種酶蛋白顆粒的大小及親水程度的不同,使各種酶在同一中性鹽中的溶解度也有差别,因而所需中性鹽的濃度也不一樣。 鹽析時,在酶穩定的前提下,使pH值盡可能接近等電點。溫度方面,除考慮對熱特别敏感的酶宜維持低溫外,一般可以不要降低溫度。 有時为了純化目的酶,還可以考慮采用分級鹽析技術,分級鹽析分離的可能性由各種酶的鹽析曲線決定。 本文參考《發酵微生物学》一書。
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