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分離提純的方法與微生物高效网上配资

發布時間:2012-12-18 11:04:55

1、吸附法 1)白土及活性氧化鋁吸附法: 白土類是以矽酸鋁为主要成分的粘土,随其種類不同,能吸附酶或蛋白質的種類和數量也不同,一般在弱酸性條件下吸附酶或蛋白質,在中或弱堿性條件下解吸。白土先用2 mol/L鹽酸活化。 活性氧化鋁與微生物高效网上配资也是最常用的吸附酶或蛋白質的吸附劑之一。可以用明礬、硫酸铵等調制,加熱使之活性化。酶或蛋白質一般在弱酸性條件下吸附,在弱堿性條件下解吸。 例如,用高嶺土吸附菠蘿蛋白酶,在pH4-6,用5%的蘇州合浦高嶺土,可以将菠蘿汁中95%的菠蘿蛋白酶吸附。 将吸附了菠蘿蛋白酶的高嶺士分離收集後,用Na2CO3稀溶液調pH至6.5-7.0,然後加NaCl或硫酸铵洗脫。作为洗脫劑,後者的效果比前者为好。當洗脫液的量达到菠蘿蛋白酶原體積的1/5時(即相應于濃縮了5倍),菠蘿蛋白酶的洗脫率为70%-85%。 2)澱粉吸附ɑ-澱粉酶的方法: 一定的酶隻作用于特定的基質,这一事實說明兩者之間有一種特别的親和力。因此,用基質與微生物高效网上配资吸附那種對基質具有特定作用的酶,在道理上是說得通的。但作为吸附劑的基質首先必須是固相物;其次在吸附酶的過程中,这種基質不會所吸附而又专門能作用于它的酶所分解,或分解程度極微;第三是單位重量的基質吸附这種特定酶的能力均應該足夠大。現發現生澱粉對ɑ-澱粉酶的吸附是比較接近于上述條件的。 (1)生澱粉的膨化處理:为了加強吸附力,生澱粉必須经膨化處理,例如,在125℃加熱處理30 min。具體做法是将商品幹澱粉放在加壓釜内攤成厚5 mm的薄層,微生物高效网上配资在各種溫度下處理20 min,然後作吸附試验,以求取更佳溫度和時間。 (2)控制變數 a.有機溶劑或中性鹽的濃度:酶是親水膠體,酶分子有周圍水化層的保護,不容易被澱粉所吸附。为了提高澱粉的吸附能力,必須降低酶分子的親水性。可以先用有機溶劑、微生物高效网上配资或中性鹽處理,加入有機溶劑的量,乙醇为35%(容量)左右,丙醇为20%(容量)左右;加入硫酸铵的量为15%-20%(重量)左右。加入的限度,一般應使目的酶不發生沉澱。如果溶液因其它雜質沉澱而發生渾濁,必須予以濾除,然後再加澱粉吸附。 b.溫度:溫度低有利于吸附,溫度高有利于解吸。在加乙醇情況下,溫度應控制在較低範圍,如0-5℃。 c.pH:原則上應在該酶穩定的pH範圍,實验表明,pH偏低一些吸附效果較好,對BF-7685a-澱粉酶,可控制pH为6.0-5.8。 d.ɑ-澱粉酶的濃度:當酶液中ɑ-澱粉酶的濃度很低時,提高其濃度能顯著提高每克澱粉吸附的a-澱粉酶的絕對量,但當酶液中ɑ-澱粉酶的濃度达到每毫升600 U以上時,再進一步提高酶的濃度,對節省澱粉的效果顯著下降。 e.澱粉的加入方式:例如,BF-7658a-澱粉酶與微生物高效网上配资發酵液的濾清液,其中加入硫酸铵的濃度为18%(重量%),a-澱粉酶活力为222 U/ml。pH5.5,在1 0℃加膨化玉米澱粉,攪拌15min。可采用兩次吸附或一次吸附法。 2、噴霧幹燥法 直接制成粉末酶制劑,可用下列幾種方式:
  1)離心式噴霧幹燥器幹燥全發酵液。
  2)先減壓濃縮後噴霧幹燥。
  3)先鹽析後噴霧幹燥。
  4)噴霧幹燥與流化床幹燥結合。
3、液體酶制劑 以Novo廠制造枯草杆菌ɑ-澱粉酶液體制劑为例:發酵网上配资發酵液加5%矽藻土後壓濾,濾液再加合成高分子絮凝劑,離心分離除去絮凝沉澱物,然後在30-35℃用降膜蒸發器蒸發,增濃3-5倍,最後加穩定劑。 本文參考《發酵微生物学》一書。
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